一、流動(dòng)相的pH應在使用范圍內
以硅膠為基質(zhì)的反相色譜柱的pH范圍為2~9,流動(dòng)相超過(guò)其pH范圍將會(huì )導致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,壽命變短。
二、去除樣品和流動(dòng)相匯總的固體顆粒樣品和流動(dòng)相中含有固體顆粒物質(zhì)會(huì )堵塞色譜柱篩板,不僅會(huì )引起柱壓的升高,而且也會(huì )引起柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析前對樣品進(jìn)行針筒過(guò)濾,流動(dòng)相過(guò)0.45um濾膜。
三、使用保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器保護柱和在線(xiàn)過(guò)濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱篩板孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例,因此除對樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾外,建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器。
四、正確使用緩沖鹽緩沖鹽使用不當會(huì )使其在流動(dòng)相(含有機溶劑)中析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結,柱壓上升;同時(shí)阻礙了基質(zhì)上的鍵合的碳鏈自由舒展,使用色譜柱的保留能力下降,柱效降低。
建議使用前要過(guò)濾,使用后要沖洗。具體方法如下:1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需要過(guò)濾流動(dòng)相1.0ml/min流速沖洗60min.
2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動(dòng)相跑梯度之前,用與初始流動(dòng)相組成相同的過(guò)濾流動(dòng)相似1.0ml/min流速沖洗60min;分析完成后,再用該過(guò)濾流動(dòng)以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動(dòng)相的梯度設定應盡量平緩,以避免梯度過(guò)程中緩沖鹽析出。
五、柱清洗方法:1、未使用緩沖鹽:每天分析完成后,用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min。
2、使用過(guò)緩沖鹽:分析完成后,先后用上述方法除去緩沖鹽,然后再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱60min。